0518-81263339
中性转化酶（Neutral invertase, NI）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。
NI主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
测定原理：
NI催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性
组成：
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产品名称 |
SC014-100T/48S |
Storage |
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提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
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试剂一：液体 |
20ml |
4℃ |
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试剂二：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
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试剂三：液体 |
15ml |
4℃ |
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说明书 |
一份 |
|
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
测定步骤和加样表：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（μl） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
50 |
50 |
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试剂一 |
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200 |
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试剂二 |
200 |
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混匀， 37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
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试剂三 |
125 |
125 |
混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中， 510nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
NI活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/ml），y为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性（μg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性（μg/min /g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05ml；V2：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001；x为标准品浓度（μg/ml），y为吸光值。
（1）按蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性（μg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鲜重计算：
单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
NI活性（μg/min /g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05ml；V2：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
| 象形图 | |
|---|---|
| 警示语 | |
| Class | |
| 警告声明 | |
| UNub | |
| 危险声明 | |
| Packing Group |
| SC014 中性转化酶（NI）检测试剂盒说明书（微量法100T48S）.pdf | 下载 |
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