0518-81263339
蔗糖酶（sucrase）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
测定原理：
本试剂盒采用3.5－二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5－二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。
组成：
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产品名称 |
SC010-100T/48S |
Storage |
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提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
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试剂一：液体 |
2ml |
4℃ |
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试剂二：粉剂 |
1支 |
4℃ |
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试剂三：粉剂 |
3ml |
常温保存 |
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说明书 |
一份 |
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试剂二：粉剂×1支 ，4℃保存，用时加入1ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：
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试剂名称（μl） |
对照管 |
测定管 |
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试剂一 |
15 |
15 |
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蒸馏水 |
15 |
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样本 |
30 |
30 |
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试剂二 |
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15 |
置于 25℃准确水浴10min
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试剂三 |
30 |
30 |
混匀， 95℃水浴5min左右（盖紧，防止水分散失），冷却至室温
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蒸馏水 |
210 |
210 |
混匀，取200μl至微量石英比色皿或96孔板中测定各管520nm吸光值，ΔA=A测定-A对照，每个测定管需设一个对照管。
蔗糖酶活力计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.1296x -0.12；x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化水解1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。
1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入反应体系中样本体积，0.03ml；V2：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，10min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.0648x -0.12；x为标准品浓度（mg/ml），y为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1542×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
蔗糖酶活力(μg/min/g鲜重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=1543×(ΔA +0.12) ÷W。
1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入反应体系中样本体积，0.03ml；V2：加入提取液体积，1ml；T：反应时间，10min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。
| 象形图 | |
|---|---|
| 警示语 | |
| Class | |
| 警告声明 | |
| UNub | |
| 危险声明 | |
| Packing Group |
| SC010 植物蔗糖酶检测试剂盒（微量法 100T48S）.pdf | 下载 |
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